Белкин В. А. к.в. н., НПП «АВИВАК»

РЕЗЮМЕ
Проведен анализ чувствительности референтных и полевых штаммов, возбудителей респираторного микоплазмоза (РМ), к наиболее часто применяемым в производстве противомикробным средствам. Учитывая значение минимальной ингибирующей концентрации, установлена устойчивость к большинству исследованных препаратов. Наиболее эффективными оказались препараты содержащие тиамутин и китасамицин. Необходимо перед использованием противомикробных средств обязательно уточнять минимальную ингибирующую концентрацию, чтобы получить ожидаемый терапевтический эффект.

ВВЕДЕНИЕ
Одним из эффективных средств контроля РМ в птицеводстве являются химиотерапевтические препараты (ХТП). Применение их в птицеводстве позволяет значительно повысить экономические показатели при выращивании птицы. Однако в последнее время в птицеводстве возникает проблема неэффективности применяемых препаратов. Успехи противомикоплазменной терапии последних 20-и лет практически достигли нулевой отметки. Это может быть проиллюстрировано минимум по 3-м характеристикам: динамикой практической значимости антимикоплазменных препаратов, количеством новых ХТП и эффективностью контроля микоплазмоза. Уже пятьдесят лет применяют в ветеринарной практике тилозин. Самыми новыми, на данный момент, антимикоплазменными ХТП являются фторхинолоны, а им уже более 20-и лет. Они модифицируются, но им придаются полезные свойства в основном по спектру противомикробного действия.

Учитывая давность использования этих препаратов в ветеринарной практике и часто бессистемное, с нарушением доз и схем их применение, оно не только не эффективно, но и наносит существенный ущерб за счет развития резистентности у вида M. gallisepticum. Определение чувствительности микоплазм к ХТП является основой для их практического применения. Для рационального подбора средств эффективной антимикоплазменной терапии и профилактики возникновения и распространения инфекции необходимо знать чувствительность выделенных культур возбудителей к антимикробным препаратам. Результаты определения чувствительности должны иметь количественное выражение. Значимость этой работы заключается в том, что эффективность ХТП будет зависеть не только от правильно определенной in vitro чувствительности, но и от ряда других, иногда трудно прогнозируемых факторов: фенотипической и генотипической изменчивости возбудителя и особенностей фармакокинетики и фармадинамики препаратов.

Целью проведенных исследований явилось выделение полевых культур РМ и определение эффективности к наиболее часто применяемым ХТП по отношению к ним в сравнении с референтными штаммами микоплазм.

М АТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Для выделения и клонирования микоплазм использовали питательные среды и методики, принятые в микоплазмотологии. Идентификацию микоплазм проводили методом РА с применением специфических сывороток и референтных штаммов микоплазм по стандартным методикам. Испытание проводили на 4-х клонированных изолятах М.gallisepticum, выделенных от птиц нескольких птицефабрик, одного от зарянки Eritracus rubecula и двух референтных штаммов – S6 и PG -31.

Оценку эффективности ХТП определяли с использованием терапевтического индекса «Т» по формуле Т=МИК/К.
Где: МИК – минимальная ингибирующая концентрация (мкг/мл)
К – концентрация данного антибиотика (мкг/мл) в крови.
Эффективность химиопрофилактики оценивается положительно, если Т< 0,3.

Результаты концентрации некоторых антибиотиков в крови кур представлены в таблице №1
Концентрация антибиотиков в крови кур (К, мкг/мл) после введения среднетерапевтических доз препарата

Таблица 1


№ п/п

Антибиотик

К мкг/мл

1

Гентамицин

6 - 8

2

Тетрациклин

3 - 5

3

Доксициклин

3 - 5

4

Китасамицин

1,3 - 3

5

Тиамутин

0,78-1,2

6

Тилозин

0,12- 0,6

7

Энрофлоксацин

1,5-1,75

Для наиболее значимых для профилактики РМ препаратов тилозина и тиамутина этот показатель установлен при выпаивании с водой в концентрации 0,05% и 0,025% соответственно.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИСЛЕДОВАНИЯ
Результаты исследований МИК антимикоплазменных препаратов in vitro к референтным и полевым штаммам М.gallisepticum представлены в таблице 2.

Таблица 2
Минимальные ингибирующие концентрации антимикоплазменных препаратов in vitro



п/п

Название антибиотика, серия, №, срок годности

Основное действующее вещество мг/г

МИК мкг/мл

Референт-ные

Полевые

1

2

3

4

5

1

Macrolan
ns 252325
05-2010

Tylosin tartrate 1000

>5

>10

2

Тилозин тартрат
Гранулят 09031089015
АО Биовет (Болгария) 03.12.

Tylosin tartrate 800

>5

>10

3

Витроцил - 352546
Inter chemic Holland 10.12

Энрофлоксацин 100

0,025

0,025

4

Тилан BJ 120201, 03.10.

Tylosin tartrate 1000

>5

>10

5

Квинокол гидро Revex NO8/4-4

Энрофлоксацин 100

0,625

0,625

6 Тилозин тартрат 09061089050,
АО Биовет (Болгария) 06.12
Tylosin tartrate 800

>5

>10

7 Препарат зашифрован Tylosin tartrate 1000

>5

>10

8 Препарат зашифрован Доксициклина гидрохлорид
200

0,625

1,25

9 Препарат зашифрован Доксициклина гидрохлорид -100 мг + Tylosin tartrate 100 >2,5 >5
10 Препарат зашифрован Флорфеникол 100 0,4 1,6
11 Препарат зашифрован Энрофлоксацин 100 0,02 0,078
12 Препарат зашифрован Тилмикозин-фосфат 250 0,016 0,016
13 Тиамутин тартрат Тиамулин 1000 0,009 0,036
14 Пульмотил Tylosin tartrate 1000 0,19 3,125
15 Колифлокс - 15,625 31,25
16 Окситетрациклин гидрохлорид Тетрациклин 15,625 15,625
17 Гентамицин БОУ Гентамицин 1000 >100 >100
18 Тиланик Tylosin tartrate 1000 6,25 >10
19 Тиланик 02.01.10-02.01.13 Tylosin tartrate 1000 0,2 0,78
20 Китасамицин Китасамицин тартрат 1000 0.09 0.19
21 Тетрациклин + тиамулин Тиамулин 200 0,0125 0,025
22 Тетрациклин + фармазин Tylosin tartrate 200 1,25 3,8

Расчет эффективности применения антибиотиков на примере окситетрациклина гидрохлорида.
МИК тетрациклина= 15.625.
Известно, что величина К тетрациклина при использовании среднеарифметических доз – 4 мкг/мл (3-5) таблица 1, максимальных доз – 10 мкг/мл.

Следовательно, в нашем случае терапевтический индекс будет равен:
Т=15.625:4=3.9 (>0,3), т.е. возбудитель микоплазмоза устойчив к антибиотику и лечение тетрациклином не даст антимикробного эффекта, даже при использовании максимальных доз (Т=15.625:10=1,5625).

Руководствуясь приведенным примером и данными таблиц с МИК антибиотиков, легко можно рассчитать их эффективность.

Из представленных в таблице 2 результатов исследований видно, что из 23 исследованных антимикоплазменных препаратов или их комбинаций только китасамицин и тиамулин были эффективны в отношении к полевым штаммам M.gallisepticum(Т<0,3). При этом их МИК к референтным штаммам была в среднем в 2-4 ниже, чем к полевым, что указывает на развитие резистентности. Ни один из препаратов, содержащий тилозин,не был эффективен в отношении полевых штаммов микоплазм.

Дополнительно проведено сравнительное испытание 4 антибиотиков макролидной группы в отношении референтных и полевых штаммов M.gallisepticum. Результаты представлены в табл. 3.

Таблица 3;
Сравнительное испытание 4 антибиотиков макролидной группы в отношении референтных и полевых штаммов M.gallisepticum

№/пп

Название антибиотика

Срок годности серия №, производитель

                                          МИК мкг/мл

S6

Pg-31

Полевой
КС-7

Полевой
И-1

1

Тилозина тартрат гранулят

09031089015
АО «Биовет» (Болгария)03.12.

10

6,25

6,25

>10

2

Тилозина тартрат гранулят

0210281330
АО «Биовет» (Болгария) 05.10

25

25

50

>50

3

Макролан

ns 252325
05-2010

7,8

7,8

7,8

15,6

4

Макролан

б/н

2

2

2

6,25

Полученные данные наглядно свидетельствуют о том, что даже одинаковые препараты от одного производителя могут существенно отличаться по своей антимикробной активности как к полевым, так и референтным штаммам микоплазм.

ВЫВОДЫ
Для рационального подбора средств эффективной антимикоплазменной терапии и профилактики распространения инфекции необходимо проводить выделение циркулирующего в хозяйстве возбудителя респираторного микоплазмоза с последующим определением его чувствительности к антимикробным препаратам с установлением минимальной ингибирующей концентрации.

Подготовлено по материалам «VIого Международного Ветеринарного Конгресса по Птицеводству» для webmvc.com