Иммуноморфологические показатели у цыплят с низкой живой массой, вакцинированных против вирусных инфекций, на фоне применения иммуномодулятора нуклевита

Карпенко Е.А., Прудников В.С. УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины», г. Витебск, Республика Беларусь

ВВЕДЕНИЕ.
Одним из звеньев в комплексе ветеринарных мероприятий, проводимых на птицеводческих предприятиях, является специфическая профилактика инфекционных болезней, что позволяет поддерживать на должном уровне сохранность и продуктивность птицы. Среди возбудителей, подавляющих функции иммунной системы птицы, выделяют вирусы инфекционного бронхита кур (ИБК), ньюкаслской болезни (НБ), болезни Марека (БМ), инфекционной бурсальной болезни (ИББ) и др. [6, c. 14]. Однако вакцинация не всегда приводит к выработке напряженного иммунитета, особенно у молодняка. Снижение напряженности иммунного ответа может быть обусловлено не только особенностями онтогенеза птиц, но и одновременной вакцинацией цыплят с различными титрами трансовариальных антител, а также в период возрастных иммунодефицитов и т.д. [1, с. 32; 2, с. 24; 3, с. 303; 4, с. 112].

Цыплята, полученные от кур-несушек 1-го цикла продуктивности, как правило, имеют меньшую живую массу, чем молодняк, вылупившийся из яиц от кур более старшего возраста. У такого маловесного молодняка также отмечают высокое содержание трансовариальных антител.

Сведений об использовании иммуностимуляторов при одновременной комбинированной вакцинации суточных цыплят со сниженной живой массой не достаточно. Поэтому исследование процессов, протекающих в органах иммунной системы у маловесных цыплят-бройлеров в ответ введение вакцинных штаммов вирусов, и влияние на них иммуномодулирующих препаратов является актуальным.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИСЛЕДОВАНИЯ.
Экспериментальная часть исследований проводилась на 75 суточных цыплятах кросса «Кобб-500». Всю птицу по принципу аналогов разделили на 5 групп по 15 голов в каждой. Цыплят 1-й группы (с массой тела более 40 г) и молодняк 2-й группы (с массой менее 40 г) иммунизировали против БМ, НБ и ИБК (вакцинами производства фирмы «Intervet»). Иммунизацию цыплят 3-й группы (с массой тела менее 40 г), проводили совместно с нуклевитом (ООО «Ветзвероцентр», РФ), который выпаивался птице с водой, начиная с суточного возраста трижды, через 3 дня, в дозе 0,3 мл/гол. Интактные бройлеры 4-й группы (с массой более 40 г) и птица 5-й группы (массой менее 40 г) служили контролем. Ревакцинацию птицы против НБ и ИБК проводили в 21-дневном возрасте.

На 9-й день после 1-й и на 3-й, 7-й день после 2-й вакцинации по 5 цыплят из каждой группы убивали путем декапитации для проведения морфологических исследований органов иммунной системы (бурса Фабрициуса, селезенка, слепокишечные и пищеводная миндалины, дивертикул Меккеля). Предварительно у цыплят брали пунктат костного мозга. Миелограмму выводили, исходя из подсчета 1000 клеток в окрашенных мазках, при этом вычисляли их парциальные формулы: лейкоэритробластический индекс, костномозговой индекс созревания псевдоэозинофилов, костномозговой индекс созревания эозинофилов, костномозговой индекс созревания эритронормобластов.

Материал фиксировали в жидкости Карнуа, затем подвергали уплотнению путем заливки в парафин по общепринятой методике. Гистологические срезы готовили на санном микротоме, для выявления РНК и дифференциации плазматических клеток окрашивали по методу Браше [5, с. 52-60, 89-114, 275-277]. Плазмоцитарную реакцию в органах иммунитета определяли путем подсчета в 50 полях зрения микроскопа количества плазмобластов, про- и плазмоцитов, митозов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИСЛЕДОВАНИЙ.
Пунктат костного мозга 9-дневных цыплят представлял собой полужидкую быстро свертывающуюся массу розового цвета. При микроскопическом исследовании были обнаружены различной степени зрелости костномозговые клетки и макрофаги. Миелограмма вакцинированных маловесных цыплят отличалась низким содержанием клеток миелобластического ряда 38,62±0,409%, в т.ч. псевдоэозинофильных клеток - 12,88±0,522% (p<0,05). Вместе с тем, у данной птицы выявлена тенденция к достоверному увеличению количества клеток эритробластического ростка по сравнению с контрольными маловесными цыплятами. При этом число лимфоцитов, плазмоцитов и моноцитов существенно не отличалось у бройлеров всех групп.

Морфологический состав костного мозга бройлеров, вакцинированных с нуклевитом, характеризовался незначительным повышением содержания клеток миелобластического ряда (р>0,05), по сравнению с цыплятами 2-й группы, но не отличался от аналогичных у интактного молодняка (44,26±3,831%) и иммунизированных цыплят со стандартной живой массой (43,90±1,384%). При выведении парциальных формул различных групп костномозговых клеток установлено, что у маловесных вакцинированных цыплят 2-й группы отмечалось снижение лейкоэритробластического индекса на 25% по отношению к интактному молодняку, что указывает на затухание микрофагальной реакции.

У птицы, вакцинированной с применением нуклевита, данный показатель не отличался от контрольного. У маловесных цыплят, иммунизированных без нуклевита, костномозговой индекс созревания эозинофилов был выше на 38%, чем у бройлеров 1-й группы (0,90±0,119), на 42%, по сравнению с молодняком 3-й группы, и незначительно отличался от аналогичного показателя у контрольной птицы. Индекс созревания эритронормобластов существенно не изменялся у цыплят всех групп.

К 3-му дню после 2-й иммунизации миелограмма у бройлеров 2-й группы характеризовалась повышением, по сравнению с предыдущим сроком исследования, количества клеток миелобластического ряда (48,00±1,468, p>0,05); увеличением лейкоэритробластического индекса на 30% и нормализацией этих показателей по отношению к контролю.

Миелограмма маловесных бройлеров, иммунизированных совместно с нуклевитом (3-я группа), характеризовалась незначительным возрастным увеличением количества клеток миелобластического ряда (47,04±2,657%) за счет усиления пролиферации клеток эозинофильной группы (28,18±2,251%; p<0,001), но данный показатель не достоверно отличался от аналогичных у цыплят других групп.

У контрольного молодняка со сниженной живой массой, по сравнению с цыплятами 2-й и 3-й групп, достоверно увеличивалось количество псевдоэозинофилов (21,64±2,909%), моноцитов (2,46±0,699%) и митозов (2,20±0,490%).

При выведении парциальных формул различных групп костномозговых клеток установлено, что у цыплят 1-й, 2-й и 4-й групп с возрастом отмечалось достоверное увеличение лейкоэритробластического индекса, что свидетельствует об активизации размножения клеток белого ростка. Отмечалось, что данный показатель был незначительно выше у подопытного молодняка, чем у интактной птицы. С возрастом у всей птицы снижался костномозговой индекс созревания псевдоэозинофилов. Среди цыплят подопытных групп индекс созревания псевдоэозинофилов у молодняка со стандартной массой (0,55±0,108) был ниже на 31%, по сравнению с маловесными бройлерами, и практически не отличался от аналогичного у птицы, обработанной нуклевитом (0,56±0,064).

Аналогичная тенденция выявлена при выведении костномозгового индекса созревания эозинофилов, что свидетельствует об активной утилизации иммунных комплексов у бройлеров с некондиционной массой по сравнению с цыплятами-нормотрофиками. Достоверных различий между этими показателями в сравнении с интактной птицей не обнаружено. Индекс созревания эритронормобластов был до-
стоверно выше у молодняка 1-й и 3-й групп. На 7-й день после 2-й вакцинации морфологический состав пунктата костного мозга вакцинированных цыплят с некондиционной живой массой (2-я группа) характеризовался снижением, по сравнению с предыдущим сроком исследований, количества клеток миелобластического ряда (42,20±1,225%; p<0,01) за счет уменьшения содержания незрелых форм псевдо- и эозинофилов, и нормализацией данного показателя по отношению к контролю (43,34±1,629%). Количество лимфоцитов и плазматических клеток незначительно отличалось от аналогичных показателей у молодняка, вакцинированного с нуклевитом, и интактных цыплят.

Под влиянием нуклевита у бройлеров со сниженной живой массой с возрастом в 1,23 раза уменьшалось количество клеток эозинофильной группы (p<0,05), а количество моноцитов, наоборот, повышалось в 2,72 раза (p<0,001). Отмечалось достоверное увеличение числа псевдоэозинофилов и базофилов по сравнению с цыплятами, иммунизированными без нуклевита.

У интактного маловесного молодняка 5-й группы, по сравнению с предыдущим сроком исследования, количество псевдоэозинофилов снижалось в 1,43 раза, а количество эозинофилов, наоборот, увеличивалось в 1,4 раза (p<0,01).

При изучении парциальных формул костномозговых клеток у цыплят различных групп у интактного молодняка было выявлено, по сравнению с вакцинированной птицей, повышение костномозгового индекса созревания псевдоэозинофилов на 24,5-56%. С возрастом значение данного индекса у вакцинированных маловесных цыплят 2-й группы достоверно снижалось на 186%, а у контрольных бройлеров 4-й группы – увеличивалось на 33%.

Костномозговой индекс созревания эозинофилов, определяющий степень утилизации иммунных комплексов, у вакцинированных цыплят был выше, чем у интактных. С возрастом значение индекса увеличивалось у птицы 1-й группы на 48%, а у молодняка 3-й группы – на 14%. Самое высокое значение данного индекса отмечалось у птицы 1-й группы - 1,20±0,068.

Пролиферация клеток красного ростка костного мозга, характеризующаяся индексом созревания эритронормобластов, активней была у вакцинированной птицы по сравнению с интактной.

По степени выраженности плазмоцитарной реакции в органах иммунной системы можно судить об активности гуморального иммунитета, возникающего в ответ на введение вакцины, т.к. плазмоциты – это результат дифференцировки В-лимфоцитов.

Чем больше образуется В-лимфоцитов в ответ на антигенное раздражение, тем выше число плазмоцитов, а, следовательно, и больше количество антиген-нейтрализующих антител.

При изучении плазмоцитарной реакции в бурсе Фабрициуса во все сроки исследования цыплят было выявлено, что у подопытного молодняка число всех видов плазматических клеток достоверно превышало аналогичные показатели у интактной птицы. У 9-дневных бройлеров, получавших нуклевит, количество плазмобластов было выше, чем у вакцинированного маловесного молодняка 2-й группы (на 11%), и интактной птицы (на 191%). Под влиянием иммуномодулятора у молодняка 3-й группы отмечалось самое высокое количество митозов по сравнению с остальными подопытными цыплятами (16,4±2,074). Следовательно, иммунизация бройлеров с нуклевитом активизирует пролиферацию клеток.

К 3-у дню после 2-й вакцинации у контрольной птицы, а так же у вакцинированного маловесного молодняка (2-я и 3-я группы) отмечалось возрастное повышение числа плазмобластов. Наиболее активное накопление проплазмоцитов (49,20±3,564), плазмоцитов (26,00±1,362; р<0,01) было у бройлеров, получавших нуклевит. Введение иммуномодулятора птице усиливало пролиферативную активность клеток – число митозов увеличивалось в 1,12-1,32 раза (p<0,05) по сравнению с остальным маловесным молодняком.

На 7-й день после 2-й иммунизации иммунологическая перестройка в бурсе Фабрициуса молодняка кур характеризовалась снижением количества бластных форм клеток у подопытных и незначительным увеличением данного показателя у интактных бройлеров. Однако, у вакцинированной птицы число зрелых клеток оставалось по-прежнему выше, чем контрольные показатели (p<0,001).

С возрастом снижалась количество про- и плазмоцитов, а так же митотическая активность клеток у всех цыплят. Иммунные реакции у молодняка, получавшего нуклевит, протекали активно: количество про- (41,00±2,739), плазмоцитов (27,40±3,578) и митозов (16,20±1,924) превышало аналогичные показатели у остального маловесного молодняка, и достигали показателей у подопытных цыплят-нормотрофиков.

Плазмоцитарная реакция в селезенке 9-дневных вакцинированных цыплят, независимо от их живой массы, характеризовалась активизацией процессов бласттрансформации, накоплением проплазмоцитов и плазмоцитов по сравнению с интактными бройлерами. У цыплят, получавших нуклевит, отмечалось увеличение на 15-168% содержания незрелых форм клеток и 73-82% - числа плазмоцитов по сравнению с остальными маловесными бройлерами.

В селезенке всех бройлеров на 3-й день после 2-й вакцинации, по сравнению с предыдущим сроком исследования, также увеличивалось число плазматических клеток (p<0,001). Иммунизация способствовала достоверному увеличению всех видов плазматических клеток у подопытной птицы по сравнению с интактной. У бройлеров, получавших нуклевит, содержание плазмобластов (13,80±0,837) и лимфобластов (18,20±1,304) было выше на 11-15% по сравнению с другими маловесными цыплятами. Количество проплазмоцитов у молодняка 2-й группы достоверно превышало аналогичный показатель у бройлеров 1-й и 3-й групп. При этом митотическая активность
существенно не изменялась у всей птицы.

При анализе плазмоцитарной реакции в селезенке у 28-дневного подопытного молодняка число зрелых форм плазматических клеток и лимфобластов, по-прежнему, превышало контрольные значения. При этом у цыплят 2-й группы плазмоцитарная реакция активизировалась с возрастом за счет увеличения бластных форм, а у молодняка, получавшего нуклевит, – более зрелых клеток. У птицы этой группы количество плазмоцитов (16,80±2,588) превышало на 23,5-87% аналогичные показатели у других маловесных цыплят и достигало значений у бройлеров 1-й группы (17,40±2,074).

Дивертикул Меккеля, пищеводная и слепокишечные миндалины у 9-й дневных подопытных цыплят были представлены скоплениями диффузной лимфоидной ткани в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта, где общее количество плазматических клеток превышало контрольные значения. У маловесных бройлеров 2-й группы увеличение данного показателя происходило за счет плазмобластов. Применение нуклевита у цыплят активизировало пролиферацию всех форм плазматических клеток.

К 3-у дню после 2-й иммунизации лимфоидная ткань в этих органах была представлена диффузными скоплениями клеток и единичными формирующимися узелками. У подопытного молодняка со стандартной массой и бройлеров, получавших нуклевит, отмечалось незначительное снижение числа бластных форм и повышение количества более зрелых клеток. У иммунизированного молодняка с малой живой массой, наоборот, происходило увеличение содержания плазмобластов и уменьшение числа проплазмоцитов и плазмоцитов на 24,62%, чем у цыплят, получавших нуклевит, и на 16,15% (p<0,05), чем у бройлеров-нормотрофиков.

Применение нуклевита молодняку на 7-й день после 2-й иммунизации приводило к более активному образованию лимфоидных узелков в периферических органах иммунитета, ассоциированных с желудочно-кишечным трактом, усилению пролиферативной активности плазматических клеток в них, по сравнению с другими маловесными бройлерами, и нормализации этого показателя по отношению к птице 1-й группы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.Одновременная комбинированная вакцинация суточных цыплят со снижен-
ной живой массой против НБ, ИБК и БМ приводит, по сравнению с бройлерами-
нормотрофиками, к угнетению миелопоэза и плазмоцитарной реакции в органах
иммунитета (на 3-16%),. Причиной может служить либо высокий уровень трансова-
риальных антител, препятствующий образованию полноценного иммунного ответа
на вакцинные штаммы вирусов, либо незрелость органов иммунной системы цыплят.
Применение иммуномодулятора нуклевита сглаживает негативное влияние вакцина-
ции на организм бройлеров и стимулирует защитные силы организма.

ЛИТЕРАТУРА
1. Громов, И.Н. Профилактика инфекционного бронхита птиц: Монография / И.Н. Громов; под. ред. Б.Я. Бирмана. - Минск.: Бизнесофсет, 2004. - 76 с.
2. Диагностика инфекционного бронхита кур / Ю.А. Бочков [и др.] // Ветеринария. – 2003. - №4. – С. 21- 24.
3. Женихова, Н.И. Морфометрические изменения в иммунокомпетентных органах суточных цыплят в зависимости от возраста матерей-несушек / Н.И. Женихова // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы Сибир. Междунар. вет. конгресса, Новосибирск, 3-4 марта 2005 г. / НГАУ; редколл.: Г.А. Ноздрин [и др.]. - Новосибирск, 2005. – С. 302-304.
4. Казанцев, И.В. Различия в материнском и постнатальном иммунитете у цыплят-бройлеров, полученных от кур-несушек разного возраста / И.В. Казанцев, Н.Т. Оссовских, А.В. Борисов // Достижения молодых ученых – в ветеринарную практику: материалы конф. молодых ученых, Владимир, 16-18 ноября, 2000 г. / ФГУ ВНИИЗЖ; редкол.: А.А. Гусев [и др.]. – Владимир, 2000. – С. 110-116.
5. Меркулов, Г.А. Курс патогистологической техники / Г.А. Меркулов. – Л., 1969. – 432 с.
6. Применение фоспренила при откорме цыплят-бройлеров / А.А. Головещенко [и др.] // Ветеринария. – 2002. - №12. – С. 14-16.

Подготовлено по материалам «VIого Международного Ветеринарного Конгресса по Птицеводству» для webmvc.com