Иммунобиологические свойства вакцинного штамма «КБК» вируса инфекционной бурсальной болезни

А.К. Алиева, к. б. н, генеральный директор ООО «Биовет»; А.С. Алиев, д. в. н., профессор Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины; В.А. Оганесян, к. в. н, зам. директора ООО «Биовет»; В.И Смоленский., д. б. н., профессор, зам директора ВГНКИ; Ю.В. Зуев, к. в. н., зав. лаб. ВГНКИ.

ВВЕДЕНИЕ
Инфекционная бурсальная болезнь (ИББ) – высококонтагиозная вирусная болезнь птиц, преимущественно 2–15 недельного возраста, проявляющейся диареей, апатией, отсутствием аппетита, иногда дрожью, вторичным нефрозом, поражением фабрициевой сумки, внутримышечными геморрагиями.

В настоящее время во всех странах признано, что единственно правильным и надежным направлением профилактики данной инфекции является применение вакцинных препаратов с использованием живых и инактивированных вакцин. В 90-е годы ХХ века птицеводческие хозяйства многих стран, в том числе России, несли значительные потери от острых вспышек ИББ на фоне применения вакцин из промежуточных штаммов. Недостаточная эффективность специфической профилактики ИББ обусловлена уровнем материнского иммунитета и степенью аттенуации вакцинных штаммов и не связана с антигенным различием вируса.

В качестве полуфабриката при изготовлении большинства вакцин против ИББ, выпускаемых в настоящее время, используется вируссодержащий материал, накопленный в культуре фибробластов эмбрионов кур, который значительно уступает по иммуногенности эмбриональному варианту.

Целью настоящего исследования является изучение иммунобиологических свойств отечественного вакцинного штамма «КБК» вируса ИББ.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Исходный вирус для получения аттенуированного штамма «КБК» выделен от больных цыплят-бройлеров 30–35 суточного возраста птицефабрики «Сосновская»Челябинской области в 1992 году, который прошел многократные последовательные пассажи на 10–11-суточных эмбрионах СПФ-кур.

Иммунобиологические свойства вакцинного штамма «КБК» вируса ИББ проверяли на базе ООО «Биовет» и ФГУ ВГНКИ в соответствии с программой проведения комиссионных испытаний по апробации данного штамма, утвержденной директором ФГУ ВГНКИ.

Видовую и штаммовую принадлежность штамма «КБК» вируса ИББ определяли в перекрестной реакции нейтрализации с референтной сывороткой к эталонному штамму «52/70-М» вируса ИББ и гетерологичными сыворотками по общепринятой методике.

Контроль на контаминацию бактериальной и грибной микрофлорой проводили путем высева по 0,25 мл вирусной суспензии в две пробирки с МПА, МПБ, МППБ и среду Сабуро. Питательные среды с посевами выдерживали в течение 10 суток в термостате при 37–38° С (среду Сабуро – 20–24°С).

Контроль на контаминацию микоплазмами проводили на специальных питательных средах и методом ПЦР в лаборатории молекулярной диагностики ФГУ ВГНКИ.

Контроль на отсутствие контаминации гемагглютинирующими вирусами проводили по результатам постановки реакции гемагглютинации вируссодержащей жидкости эмбрионов СПФ-кур, зараженных штаммом «КБК» вируса ИББ.

Контроль на отсутствие контаминации вирусами оспы птиц, инфекционного ларинготрахеита, инфекционного бронхита и аденовирусами птиц проводили по патологоанатомическим изменениям зараженных эмбрионов СПФ-кур.

Биологическую активность вакцинного штамма «КБК» определяли методом титрования на 10–11-суточных эмбрионах СПФ-кур.

Антигенную активность вакцинного штамма изучали серологически через 21 сутки после его введения цыплятам.

Иммунногенную активность штамма «КБК» оценивали по результатам контрольного заражения вирулентным штаммом «52/70-М» цыплят 14 суточного возраста вакцинированных и контрольных групп.

Безвредность и реактогенность вакцинного штамма «КБК» определяли путем введения 10-кратной иммунизирующей дозы цыплятам, свободным от специфических антител. Гистологическое подтверждение безвредности штамма проводили по результатам исследования фабрициевых сумок от 5 цыплят через 4 сут после введения вируса. Одновременно исследовали фабрициевые сумки от 5 цыплят контрольной группы.

Вакцинный штамм «КБК», с целью проверки на иммуносупрессивную активность, вводили подкожно суточным СПФ– и иммунным цыплятам в дозе 2,5 lg ЭИД50/см3. В качестве контроля служили не вакцинированные, а также СПФ– и иммунные цыплята, зараженные вирулентным вирусом «52/70-М» в дозе 100 ИД50/см3.

В возрасте 14 сут. цыплят опытной и контрольной групп вакцинировали против Ньюкаслской болезни вакциной из штамма «Ла-Сота», согласно инструкции по ее применению, и через 14 сут проверяли титр антигемагглютининов в сыворотке крови во всех группах цыплят.

Морфологию штамма «КБК» вируса ИББ изучали с помощью электронного микроскопа совместно с профессором Бакулиным В.А.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИСЛЕДОВАНИЙ
Результаты перекрестной реакции нейтрализации с референтной сывороткой и гетерологичными сыворотками свидетельствуют, что апробируемый штамм ««КБК»»нейтрализуется только гомологичной сывороткой и относится к I серотипу вируса ИББ. Коммиссионно подтверждено, что апробируемый штамм «КБК» биологически активен (титр вируса 6,5 lg ЭИД50/см3) и свободен от контаминантов.

Введение вакцинного штамма «КБК» цыплятам 14-суточного возраста индуцирует образование специфических антител с активностью 1:2 – 1:8 в РДП и в ИФА 1: 3000 и выше.

Опыты по оценке иммуногенной активности показали, что вакцинация СПФ - цыплят вирусом «КБК» в дозе 2,0 lg ЭИД50/см3 методом выпаивания обеспечивает 100% иммунитет. Однако, учитывая, что для вакцинации цыплят с пассивным иммунитетом требуется некий «запас» вируса, в качестве иммунизирующей была выбрана доза 2,5 lg ЭИД50/см3.

Безвредность вакцинного штамма «КБК» проверяли на СПФ-цыплятах 14-дневного возраста. Для этого 15 цыплятам ввели перорально вирус в дозе 3,5 lg ЭИД50/мл. По истечении срока наблюдения (15 дней) цыплята опытной и контрольной групп были убиты с целью выявления патологоанатомических изменений, свойственных ИББ. Во всех внутренних органах и фабрициевой сумке подопытных цыплят патологоанатомические изменения не выявлены. Сохранность структуры фабрициевой сумки была подтверждена и при гистологическом исследовании органа.

Результаты по оценке иммуносупрессивной активности штамма «КБК» представлены в таблице 1.

Из данных, приведенных в табл. 1, следует, что средний титр антигемагглютининов в группе, где цыплятам ввели вакцинный штамм, составил 7,3 log2, что несколько ниже по сравнению с показателями интактных цыплят. Однако имеющаяся разница статистически недостоверна. Введение суточным СПФ-цыплятам вирулентного штамма вызывало значительное снижение иммунной реакции организма на последующее введение вакцины «Ла-Сота». Так, титр антигемагглютининов в РЗГА у цыплят после переболевания ИББ составил – 2,4 log2 при 8,6 log2 у интактных цыплят.

Заражение цыплят с пассивным иммунитетом вирулентным штаммом ИББ, как и введение вакцинного штамма вируса, не оказывало существенного иммунодепрессивного влияния, и это дает основание предположить, что пассивные антитела к вирусу ИББ предупреждают не только клиническое проявление заболевания, но и предохраняют птицу от иммуносупрессивного влияния вируса ИББ.

Таблица 1
Иммуносупрессивное влияние вируса ИББ на цыплят при вакцинации против ньюкаслской болезни

Титры антител в сыворотке крови цыплят во всех группах, вакцинированных против Hьюкаслской болезни, были почти на одинаковом уровне.

Результаты, полученные в ходе этих исследований, дают основание считать, что вакцинный штамм «КБК» вируса ИББ безвреден для суточных цыплят, тогда как иммуносупрессивное влияние вируса ИББ для этой категории цыплят достаточно выражено.

Следовательно, пассивные антитела предупреждают не только клиническое проявление заболевания среди цыплят, но и обеспечивают сохранность морфологической структуры фабрициевой сумки, что необходимо учесть при составлении схемы вакцинации против ИББ.

Электронно-микроскопическими исследованиями выявлено наличие в препаратах как одиночно расположенных вирионов, так и в виде скоплений с размерами 50-60 нм, икосаэдрическим типом симметрии, шестигранной, округлой формы. Капсид вириона окружен наружным слоем, который состоит из крупных морфологических звеньев (капсомеров) диаметром 12 нм. В капсиде насчитывалось 32 капсомера. Во многих частицах периферическая область капсомеров просматривалась в виде короны. Отсутствие контаминирующих микроорганизмов и вирионов атипичной формы свидетельствует об однородности и чистоте популяции изучаемого штамма.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
По результатам проведенных исследований комиссия заключила, что апробируемый штамм «КБК» свободен от контаминантов, биологически активен (титр вируса 6,5 lg ЭИД50/см3), безвреден для цыплят, обладает выраженными иммуногенными свойствами и не вызывает иммунодепрессию у вакцинированной птицы. Иммуногенная эффективность штамма «КБК» на СПФ-цыплятах составила 100%.

Исследования по изучению иммунобиологических свойств штамма завершились его депонированием во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (Россия, 123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5 ФГУ ВГНКИ) под номером штамм «КБК №117-ДЕП».

Подготовлено по материалам «Vого Международного Ветеринарного Конгресса по Птицеводству» для webmvc.com