Е. М. Ленченко, И. И. Гламаздин
Московский государственный университет прикладной биотехнологии

Источник: материалы XVI Московского международного конгресса по болезням мелких домашних животных

Прогресс во всех отраслях, в том числе и паразитологии, определяется уровнем развития методологии и способов получения и обработки информации. С целью познания взаимоотношений паразита и хозяина используются разнообразные методологические подходы, позволяющие проводить структурно-функциональные исследования на тканевом, клеточном, молекулярном уровнях организации. Исследования влияния паразитов на клетки, ткани и органы хозяина в состоянии развития, соподчиненности и функциональной взаимосвязи, позволили накопить значительный научный материал, и разработать эффективные методы диагностики, лечения и профилактики паразитарных болезней. Однако в настоящее время мало изученными являются проблемы пролиферации клеток, закономерности дифференцировки и детерминации разнообразных клеточных и тканевых структур беспозвоночных животных на разных ступенях эволюционной лестницы. Учитывая малоизученность вопроса, целью данной работы явились гистохимические и электронно-микроскопические исследования нематод.

В опытах использовали самок Ascaridia galli, извлеченных из кишечника цыплят-бройлеров. Для гистологических и цитохимических исследований пробы обрабатывали общепринятыми методами. Электронно-микроскопические исследования проводили общепринятыми и модифицированными нами методами подготовки препаратов для световой, сканирующей и просвечивающей электронной микроскопии. Объекты исследовали в световом микроскопе “Биолам-3”, электронном микроскопе “Hitachi-800” со сканирующей приставкой “Hitachi-8010” при ускоряющем напряжении 75 кВ и инструментальном увеличении 1-300 тысяч. Образцы, предназначенные для исследования в сканирующем электронном микроскопе, напыляли золотом на установке “Е-102”.

При гистологическом исследовании структуры тканей гельминтов класса Nematoda установлено, что самки Ascaridia galliимеют типичную структуру, в соответствии с видовым описанием определителей гельминтов. Так, у гельминтов, окрашенных гематоксилином и эозином, выявлялись: кутикула, под которой находилась гиподерма, вдающаяся внутрь полости тела в виде выступов; в промежутках между ними находились мышечные клетки. Нервные стволы проходили в спинном и брюшном выступах. В центре полости выявлялись кишечник и многочисленные срезы половых органов: яичники и яйцеводы – небольшие округлые образования и матка, представляющая собой крупное округлое образование с большим количеством яиц в просвете.

Для выяснения вопросов секреции и всасывания питательных веществ аскаридиями проводили гистохимическое исследование по выявлению ферментов группы карбоновых эстераз (не специфической эстеразы и холинэстеразы). Выбор этих ферментов для исследований обусловлен их физиологической значимостью. При выявлении неспецифической эстеразы, участвующей в катаболизме жиров, методом Гомори было установлено, что в кутикуле аскаридий не обнаруживалось наличие карбоэстеразной активности. Окрашенные продукты реакций выявлялись более отчетливо в гиподерме, являющейся основным вместилищем запасного жира у нематод. В среднем отделе кишечника аскаридии указанные ферменты выявлялись в апикальных полюсах эпителиоцитов; при этом продукты конечных реакций располагались очень плотно, и окраска была равномерной и гомогенной. В области около ядра эстеразная активность была наиболее выраженной, что обусловпено наличием эндоплазматической сети и капель жира. На основании этих данных можно сделать заключение, что неспецифические эстеразы пространственно связаны с отложениями жира.

При выявлении холинэстеразы по методу Карновского выявлено, что в кутикуле аскаридии отсутствовала холинэстеразная активность. Тогда как в соматической мускулатуре наблюдалась высокая энзиматическая активность указанного фермента, свидетельствующая о том, что деятельность мышечной системы нематод осуществляется с участием холинергического механизма.

При цитохимическом исследовании с помощью реакции Шифф-йодной кислоты (ШИК-реакции) в кутикуле аскаридии выявлялись полисахаридные комплексы, свидетельствующие о родстве с полисахаридами гликокаликса кишечника.

В опытах по изучению поверхностных структур нематод при электронно-микроскопическом исследовании самок Ascaridia galli выявлялась гладкая кутикула. В отдельных участках нарушения целостности кутикулы можно было увидеть тонкие волокна соединительной ткани гиподермы, вдающиеся внутрь полости тела в виде выступов; в промежутках между волокнами находились мышечные клетки.

На основании собственных исследований и анализа литературы можно сделать заключение, что у гельминтов Ascaridia galli наблюдается высокая активность ферментов, обусловливающих деятельность мышечной ткани; в кутикуле выявлены полисахридные комплексы, родственные гликаликсу кишечника позвоночных животных; при электронно-микроскопическом исследовании под гладкой кутикулой обнаружены волокна соединительной ткани гиподермы и мышечные клетки. Определяя направление перспектив научных исследований в области познания биологии нематод, следует отметить необходимость расширения электронно-микроскопических исследований патогенеза и иммунитета при гельминтозах, раскрытию механизма иммунных и аутоиммунных реакций, возникающих в организме хозяина при паразитировании гельминтов.

Аннотация. При исследовании структуры тканей гельминтов класса Nematoda гистохимическими методами установлено, что самки Ascaridia galliимеют типичную для вида структуру, наблюдается высокая активность ферментов, обусловливающих деятельность мышечной ткани, полисахариды кутикулы и гликаликса кишечника позвоночных животных являются родственными. В сканирующем электронном микроскопе под гладкой кутикулой обнаружены волокна соединительной ткани гиподермы и мышечные клетки.

Summary
Glamasdin I.I., Lencenko E.M. Examining the nematoda using histochemical and electronic microscope methods. Moscow State University of Applied Biotechnology (MGUPB)

While examining the structure of the tissues of helminths Nematoda using histochemical methods it was established that females Ascarida galli have a structure typical for the species; the activity of the ferments which determine the functioning of the muscular tissue is high; polysaccharides of the cuticle and of glycocalics of the vertebrates intestines are related; the fibre of the сonnective tissue of hypoderm and muscular cells were discovered under the smooth cuticle in the scanning electronic microscope.