Герасимов, М.Н. Воробьева, Р.Х. Равилов
Республиканский центр профилактики и борьбы со СПИДом (г. Казань)
Казанская государственная академия ветеринарной медицины

Источник: материалы Московского международного ветеринарного конгресса

Актуальность проблемы токсоплазмоза обусловлена практически повсеместным распространением возбудителя в природе, высокой частотой инфицированное и способностью токсоплазм длительно персистировать в пораженных клетках, а также опасностью заражения людей от животных.

Основным хозяином паразита являются кошки. Проведенные в США исследования по изучению инфицированности кошек показали, что 30% из них поражены токсоплазмозом. Крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, кролики заражены паразитом по разным данным на 5-15%.

Латентные формы токсоплазменной инфекции преобладают над клинически выраженными. Значительный полиморфизм клинических проявлений при токсоплазмозе и разнообразный характер течения болезни практически исключают возможность постановки диагноза только на основании клинической картины, в связи с этим возрастает роль лабораторных исследований, включающих паразитологические и иммунологические методы.

Паразитологические исследования включают световую микроскопию и выделение паразита. Метод прямой микроскопии несложен и доступен, но не всегда результативен, а выделение токсоплазм не пользуется широкой популярностью из-за большой трудоемкости и необходимости соблюдения режимных условий при работе с живым возбудителем.

В подавляющем большинстве случаев при диагностике токсоплазмоза ориентируются на данные серологических исследований. Наиболее популярными методами ретроспективной диагностики заболевания у людей являются реакция непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ) и иммуноферментный анализ (ИФА). РНИФ и ИФА успешно сочетают в себе чувствительность, специфичность и простоту выполнения теста. В ветеринарной практике для этих целей до настоящего времени применяют реакцию связывания комплемента (РСК), которая по своим характеристикам значительно уступают двум первым методам.

Исходя из вышеизложенного перед нами стояла задача разработать иммуноферментный метод индикации антител против токсоплазм в сыворотках крови кошек.

Иммуноферментное выявление антител выполняли по непрямому методу. Учет результатов ИФА проводили на фотометрах Titertek Multiskan при длине волны 492нм, измеряя оптическую плотность цветной реакции субстрата (ОП). Результаты подлежали оценке и анализу, если в контроле конъюгата среднее значение ОП составлял не более 0,100, а в отрицательном контроле - не превышала 0,150 оптической единицы (о.е.). Пробу считали положительной, если ОП в лунках с исследуемой сывороткой не менее чем в 2 раза превышало ОП отрицательного контроля. ОП положительного контроля при этом должно быть не ниже 1,500 о.е.

При обследовании сывороток крови 23 кошек, используя разработанный нами иммуноферментный тест, было выявлено 3 положительно реагирующие пробы (13,04%). При прямой микроскопии образцов фекалий у этих животных нам удалось обнаружить ооцисты только у 1 кошки. Показатели ОП соответствующей сыворотки в ИФА составляла 1,984 о.е.

Подобранные нами условия выполнения ИФА позволяют также вести визуальный учет результатов реакции. Исследуемый образец оценивали как положительный, если имелись отчетливые различия в интенсивности окрашивания раствора субстрата в лунках с исследуемой пробой по сравнению с таковыми в лунках с контролем субстрата и отрицательной сывороткой.

Данное качество сконструированной тест-системы дает широкую возможность ветеринарным лабораториям, не оснащенным фотометрами, проводить первичный иммунологический скрининг инфицированности кошек токсоплазмами.