Новак М.Д., Михин А.Г.
Костромская государственная сельскохозяйственная академия, г. Кострома

Источник: Материалы 12-го МОСКОВСКОГО ВСЕРОССИЙСКОГО ВЕТЕРИНАРНОГО КОНГЕССА

Большое значение в комплексе профилактических и оздоровительных мероприятий при токсокарозе имеет иммунодиагностика синдрома “larva migrans”.

На основе экскреторно-секреторных и соматических антигенов личинок второй стадии Toxocara canis разработаны иммунореагенты для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). Изучение специфичности полученных диагностических препаратов Toxocara canis в опытах с гетерологичными иммунными сыворотками против Ascaris suum показало положительные перекрестные результаты в РНГА – 1:20. Таким образом, диагностический титр РНГА на токсокароз составляет 1:40.

Материалом для основного опыта служили сыворотки крови собак, экспериментально и спонтанно зараженных токсокарами, положительные и отрицательные контрольные диагностические образцы из набора для ИФА “Тиаскар” (НПО “Вектор-Бест”, г. Новосибирск).

При исследовании 14 экспериментально и 25 спонтанно зараженных Toxocara canis щенков, а также по результатам скрининга трех серий диагностических препаратов установлена высокая специфичность и активность экскреторно-секреторных и соматических личиночных антигенов токсокар. Кутикулярный антиген, полученный из имагинальных форм Toxocara canis, показал в РНГА неспецифический результат.

Тестирование зараженных токсокарами щенков позволило выявить положительные результаты РНГА с экскреторно-секреторным и соматическим антигенами личинок Toxocara canis: 1:160 - 1:2560 и 1:40 - 1:640 соответственно.

Максимальный уровень антител к Toxocara canis в сыворотках крови подопытных щенков зарегистрирован на 27 и 42 дни инвазии. Экскреторно-секреторный антиген личинок Toxocara canis показал более высокую специфичность по сравнению с соматическим (титр иммунной сыворотки на два разведения выше).

В целом, оптимальные показатели специфичности полученных иммунореагентов и чувствительности РНГА при токсокарозе собак свидетельствуют о высокой диагностической эффективности метода.

Сохранение активности нативных антигенных препаратов из личинок Toxocara canis и эритроцитарных диагностикумов имеет значение в лабораторной практике. Первично обработанные, очищенные многократным центрифугированием антигены сохраняли в замороженном виде в пластиковых контейнерах (по 5, 10 мл) при -18° С. Снижения активности антигенов не наблюдалось в течение 15 месяцев (срок наблюдения). Эритроцитарные антигенные диагностикумы, сохраняемые при температуре +4-6° С, демонстрировали в РНГА одинаково высокую чувствительность через 12 месяцев после изготовления.

Определение чувствительности, информативности реакции непрямой гемагглютинации при токсокарозе собак проводили на основании сопоставления результатов серологического и гельминтоовоскопического исследований 5 щенных сук 3-5 лет (срок беременности – 35-45 дней). При помощи РНГА антитела к Toxocara canis обнаружены у всех тестируемых животных (максимальный титр – 1:2560, методом Фюллеборна яйца токсокар не выявлены. У собак старше 3 лет половозрелые особи токсокар, как правило, не развиваются, в их тканях присутствуют только мигрирующие или инкапсулированные личинки.

Высокие титры антител к Toxocara canis у щенных сук и трансплацентарная передача возбудителя связаны с влиянием гормонов – эстрогенов, циркулирующих в кровеносном русле. Гормоны способствуют разрушению соединительнотканных капсул, освобождению и активной миграции личинок токсокар.

С целью объективного представления об эффективности диагностики токсокароза собак в РНГА проведено сопоставление показателей серологического и копроовоскопического исследований щенков 21-25 дневного возраста, рожденных от двух из пяти серопозитивных собак.

При исследовании сывороток крови от щенков во всех случаях получены положительные результаты на токсокароз в реакции непрямой гемагглютинации -1:320-1:2560. Методом Фюллеборна яйца Toxocara canis установлены у всех щенков из двух пометов от серопозитивных на токсокароз собак.

Изучение динамики антител к Toxocara canis в РНГА при экспериментальном заражении 6 щенков 2,5-3 мес. инвазионными яйцами (от 70 до 900) показало повышение уровня специфических антител на 14, 25 и 37 дни инвазии до 1:320, 1:2560 и 1:640 соответственно. В последующие дни после заражения титры антител к токсокарам у подопытных животных оставались на уровне 1:320-1:640. Тестирование сывороток крови подопытных животных позволило установить более высокую чувствительность РНГА с экскреторно-секреторными антигенами по сравнению с соматическими. Аналогичные результаты получены в опыте на щенках, двукратно зараженных токсокарами (суперинвазия).

Summary
Novac M.D., Michin A.G.: Reaction indirect hemagglutination for diagnostic of “larva migrans” at toxocarosis of dogs. Kostroma` State agricultural Academy, Kostroma, Russia

The study of larval antigenes of Toxocara canis in reaction indirect hemagglutination has allowed to establish optimal parameters of specificity and activity of excretory-secretory components (titr of antibodies - 1:2560 with a positive control sample) and of somatiche antigenes of larves (titr of antibodies - 1:640-1:1280). Cuticulare antigene of adulte forms Toxocara canis has shown in not specific result.

Developed immunoreagents are adapted for diagnostics of larval toxocarosis with the help IHАR. In experience on young dogs experimentally infected by invaisionaly eggs of Toxocara canis confirm high parameters of specificity and sensitivity IHАR with excretory-secretory and somatiche antigenes of larves of the second stage (the maximal titr of antibodies makes accordingly - 1:2560 and 1:640).