Иммуногистохимический анализ экспрессии протеина супрессора опухоли р53 у собак с опухолями молочных желез

Мищенко С.Н. -ДГАУ; Мационис А.Э. академик РАЕН, доктор медицинских наук Ростовское областное патологоанатомическое бюро; Отдел экспериментальной патологии

Источник: материалы Московского международного ветеринарного конгресса

Ген супрессор опухоли р53 является самой распространенной мишенью генетических изменений при раке (Nakopoulou, L. L., Alexiadou, A., Theodoropoulos, G. E., 1996), и мутации этого гена являются одной из наиболее частых генетических аберраций в системе эпителиальных опухолей, включая опухоли молочной железы (Gamblin, R. М., Sagartz, ]. E. and Couto, С. G. 1997).

Материал и методы. Для изучения экспрессии протеина супрессора опухоли р53 были иммуногистохимически исследованы опухоли молочных желез 56 собак. Для иммуногистохимического метода использовались тканевые срезы из парафиновых блоков толщиной 3 мкм.

Иммунореактивность первичных антител фирмы DAKO обнаруживали с помощью вторичных антител, конъюгированных с [ероксидазной системой, составляющей набор реактивов En Vision TM + System фирмы DAKO.

Предварительную обработку срезов ферментами, СВЧ-излучением или помощью высокой температуры под давлением (press-cooke) проводили в соответствии с протоколами для соответствующих антител. Все реактивы DAKO EnVision™+ System, HRP с АЕС+ субстратом выпускаются в готовой для использования форме.

Для блокирования любой эндогенной активности препараты инкубировались с блокатором эндогенной пероксидазы на 5-ой минуте. Сначала препараты инкубировали с соответствующим разведенным первичным антителом, а затем с маркированным полимером с использованием двух, следующих друг за другом 30-минутных инкубирований. Окрашивание заканчивалось 5-30-минутным инкубированием с З-амино-9-этилкарбазолом (АЕС)+ субстракт-хроматогеном, в результате чего образовывался красным окрашенный осадок в зоне наличия исследуемой антигенной структуры. В некоторых случаях, особенно в случае изучения локализации антигенов в ядре, применялся другой хромоген диаминобензидин, который давал темно-коричневое окрашивание.

Результаты. Экспрессия протеина р53 была обнаружена в 13 из 56 исследованных опухолей молочной железы. Распределение ядер, иммунореактивных на р53, было обычно равномерным, а в некоторых образцах наблюдалось цитоплазматическое окрашивание. Три (2 простых аденомы, 1 сложная) из 23 доброкачественных опухолей обнаружили положительное иммунологическое окрашивание на р53, и 10 (9 аденокарцином и 1 карциносаркома) из 33 злокачественных опухолей экспрессировали р53. Цитоплазматическое окрашивание наблюдалось в 2 аденомах и 5 аденокарциномах. При исследовании лимфатических узлов с метастазами во всех случаях выявлялась экспрессия патологических форм р53.

Выводы. В нашем исследовании иммунореактивность к р53 отмечена в 13% доброкачественных опухолей молочных железах и 30.3% злокачественных опухолях, преимущественно в аденокарциномах. Эти результаты сходны с данными, полученными в аналогичных работах по иммуногистохимическому анализу рака груди человека, которые показали, что частота положительного окрашивания на р53 карцином была достоверно выше, чем аденом (Thor, A. D., Moore, D. H., Kawasaki, E. S. 1992).

Возможными основаниями высокой доли доброкачественных опухолей молочных желез у собак, экспрессирующих р53, могут быть неадекватные выявления не р53 протеина, а выявление непатологических форм так называемого «дикого типа» протеина р53 (Wolf, J. С., Ginn, P. E., Homer, and Kurzman, I. D. 1997). Таким образом, сверхэкспрессия р53 происходит на всех этапах опухолей молочной железы, а поскольку р53 непосредственно участвует в важных клеточных функциях, включая регуляцию клеточного цикла, изменение гена р53 может быть важным этапом в инициации развития опухолей молочных желез у собак.